Изучить основные этапы бактериологического исследования метода диагностики сальмонеллёзов.

1. Учет посевов сальмонелл на среде Левина и Олькеницкого (демонстра­ция).

2. Контроль чистоты наделенной культуры сальмонелл (со среды Олькеницкого приготовлен мазок, окрашен его по Граму). Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные микропрепараты возбудителей сальмонеллёзов S.entericaspp. enterica ser. enteritidis, typhimurium, choleraesuis.Возбудители сальмонеллёзов — идентичные по морфоло­гии грамотрицательные палочки с закругленными концами.

3. Идентификация выделенной культуры возбудителя:

— по антигенным свойствам – учет ориентировочной реакции агглютинации на стекле с диагностическими монорецепторными сальмонеллезными агглютинирующими О- и Н сыворотками в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта;

— по биохимическим свойствам — определение биохимической активности изучаемой культуры по «пестрому» ряду Гисса или Пешкова (демонстрация). Обратить внимание на расщеп­ление глюкозы, отсутствие расщепления лактозы и сахарозы.

— по фаголизабельности (учет пробы с фагом — демонстрация)

4. Определение чувствительности выделенной культуры к ан­тибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

93.79.221.197 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

Лабораторная диагностика сальмонеллезов;

Лабораторная диагностика брюшного тифа и паратифов. проводится с учетом патогенеза заболевания. Основными методами лабораторной диагностики являютсябактериологический и серологический.

При сальмонеллезах иммунитет нестойкий непродолжительный.

С первого для заболевания исследуют кровь на гемокультуру (бактериологический метод). Для этого 5-10 мл крови больного засевают в колбы с 50-100 мл питательной элективной среды с желчью – среды Раппопорта. Желчь нейтрализует бактерицидные свойства сыворотки крови. После инкубирования в термостате производят пересев на среды Эндо, Левина, Плоскирева (для получения изолированных колоний и чистых культур из них). Прозрачные бесцветные колонии отсевают на среду Ресселя (Олькеницкого), на которой учитывают ферментацию сальмонеллами глюкозы и отсутствие ферментации лактозы.

Чистую культуру идентифицируют по биохимическим свойствам(сахаролитическим — по результатам посева на среды Гисса и протеолитическим — тестами на индол, Н2S, NH3 в посевах на МПБ) и антигенной структуре. Для сероидентификации ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой к сальмонеллам групп А, В, С, Д, Е. Положительный результат свидетельствует о принадлежности выделенной культуры к роду Salmonella. Затем определяется О-серогруппа в реакциях агглютинации с отдельными О-сыворотками (входящими в поливалентную сыворотку). Для определения серовара (вида возбудителя) устанавливают Н-антигены с монорецепторными Н-сыворотками первой, а затем второй фазы. Для полноты идентификации выделенную культуру проверяют на лизабельность поливалентным брюшнотифозным фагом.

S. typhi, кроме того, фаготипируют (определяют фаговар) Vi-фагами для установления эпидемиологической цепочки.

Для ранней ускоренной диагностики перспективным является иммунофлюоресцентный метод, позволяющий выявить специфический антиген в исследуемом материале ( крови, костном мозге).

Со второй недели заболевания проводятбактериологические исследования с испражнениями(получение копрокультуры), мочой(получение уринокультуры), желчью.

Испражнения (мочу, желчь) непосредственно, а также после проведения их через среды обогащения засевают на одну из дифференциально-диагностических сред (Эндо, Левина, Плоскирева) так, чтобы выросли изолированные колонии. Из бесцветных колоний получают чистые культуры, которые идентифицируют так же, как и гемокультуру.

Серодиагностика(выявление антител в сыворотке больного) осуществляется с конца первой — начала второй недели заболевания путем постановки реакции агглютинации Видаля с О-, Н-брюшнотифозными и А- и В-паратифозными диагностикумами.

Более чувствительной является РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) с О-, Н-, Vi-эритроцитарными диагностикумами.

Положительная реакция агглютинации с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а положительная реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших, и у привитых, так как О-антитела накапливаются в разгар заболевания и исчезают к моменту выздоровления, а Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших длительное время. Диагностический титр реакции Видаля 1:200. По нарастанию титра агглютининов в динамике можно отличить имеющуюся инфекцию от реакции на прививку. В последнем случае нарастания титра антител не будет.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации. Vi-антитела после полного выздоровления исчезают, но при наличии брюшнотифозного носительства они присутствуют постоянно. Выявление Vi-антител в титре 1:40 и выше имеет диагностическое значение: такие лица подлежат многократному бактериологическому обследованию.

Основным методомлабораторной диагностики является бактериологический. Исследуют рвотные массы, промывные воды желудка, дуоденальное содержимое, (желчь) кровь, мочу, фекалии, гной или экссудат из воспалительных очагов, пищевые продукты. Засевают на среды обогащения (селенитовый или 20% желчный бульон), а затем на висмут-сульфит агар (высокоселективная среда), Плоскирева (среднеселективная) Эндо, Левина.

Схема микробиологических исследований аналогична таковым при выделении и идентификации гемо-и копрокультуры при брюшном тифе.

Из серологических методов применяют реакцию агглютинации с О- и Н-диагностикумами, иногда с аутоштаммами бактерий, выделенными от больных; более чувствительна РНГА с эритроцитарными диагностикумами.

Возможно использование биологического метода путем вскармливания белых мышей зараженными пищевыми продуктами. S. enteritidis и S. typhimurium вызывают гибель мышей через 1-2 суток. Посевы крови из сердца и материала из внутренних органов дает рост сальмонелл.

Для экспресс-диагностики применяют иммунофлюоресцентный метод исследования (обнаружение антигенов возбудителя с помощью иммунных сывороток, обработанных флюорохромами).

Диагностика Сальмонеллеза — Методы

Среди различных инфекционных поражений организма особое место занимает сальмонеллез – острое заболевание, которое сопровождается сильной интоксикацией и желудочно-кишечным расстройством. Возбудители инфекции – бактерии из рода сальмонелл. Отличительной чертой данной патологии является то, что диагностика сальмонеллеза – довольно сложная задача для врачей, поскольку подтвердить присутствие инфекции можно только лабораторным путем.

Причины развития и симптомы

Основные носители данной инфекции – животные. Причем сальмонеллез у животных может протекать скрытно и продолжаться в течение долгих лет. Как правило, в организм человека сальмонелла попадает с пищей через продукты питания – молоко, яйца, рыбу, мясо. Также источником заражения может стать плохо очищенная вода из водопровода, либо вода из открытых водоемов. После проникновения в организм человека сальмонеллы «поселяются» в слизистой оболочке тонкой кишки и начинают выделять токсины, которые и являются причиной развития интоксикации, боли, диареи.

Проявления сальмонеллеза могут начаться уже через 6 часов после заражения, хотя нередко инкубационный период длится 2 – 3 суток. Ярко выраженные симптомы: недомогание, сильная слабость, головная боль, озноб, высокая температура тела (38 – 39°), тошнота, рвота, боль (преимущественно схваткообразная) в животе. Развивается сильнейшая диарея, причем стул пенистый, жидкий, зеленоватого цвета и зловонного запаха. Случается, что через пару дней в выделениях наблюдаются примеси крови и слизи. Острое течение болезни длится 2 – 10 дней. Осложнениями сальмонеллеза могут быть инфекционно-токсический шок, реактивный полиартрит, токсическое расширение тонкой кишки, перитонит. Основные методы диагностики этого инфекционного поражения организма: бактериологический и серологический (включая ИФА – иммуноферментный анализ).

Бактериологический метод

При данном методе лабораторного исследования исходным материалом для обнаружения сальмонелл являются кровь, моча, промывные воды желудка, рвотные массы, каловые испражнения и даже спинномозговая жидкость. Сущность бактериологического метода: посев собранного материала на питательные среды. Это основной способ выявления инфекций при любых кишечных бактериальных заболеваниях. В частности, посев желчи, мочи, кала проводят на так называемые среды обогащения (среду Кауфмана, Мюллера и т.п.), либо на питательные элективные среды (висмут-сульфитный агар, среду Плоскирева и др.). А для посева крови используют 10 – 20% специальный желчный бульон. При бактериологическом исследовании самый высокий процент положительных результатов наблюдается в первую неделю после заражения.

Серологический метод

Особенность серологического метода – обнаружение в крови зараженного человека специфических антител и исследование их титра. Для этой цели используют такие методики, как реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) или реакцию агглютинации (РА). На практике чаще применяют реакцию РНГА, обладающую более высокой чувствительностью. Взятую из пальца или вены кровь (1 – 2 миллилитра) разводят раствором (изотопическим) хлорида натрия с последующим добавлением диагностикума, который содержит антигены сальмонелл. Если наблюдается нарастание титра специфических антител в 2 – 4 раза и больше, то диагностируют сальмонеллез.

Иммуноферментный анализ

В настоящее время при исследовании мочи и надосадочной жидкости (копрофильтратах) применяется более перспективный и эффективный серологический метод обнаружения специфических антител – иммуноферментный анализ (ИФА). Он позволяет определить специфические иммуноглобулины различных классов – A, G, M. В частности, наличие антител класса М говорит о том, что в организме активно протекает инфекционный процесс.

Особенности лечения

Конечно, диагностику сальмонеллеза необходимо проводить как можно быстрее, поэтому при тяжелых расстройствах желудочно-кишечного тракта, сопровождаемых высокой температурой тела, рвотой, диареей, следует немедленно обращаться к врачу. Лечение сальмонеллеза длительное, а в тяжелых случаях больного помещают в стационар. Зараженному человеку нужно снять воспаление, вывести токсины, уничтожить возбудителя инфекции. Поэтому, кроме антибиотиков, используются самые разные лекарственные препараты. Кроме основного лечения, назначаются витаминотерапия и строгая диета. Берегите себя!

Медицинские методы диагностики сальмонеллеза

Сальмонеллез – кишечная инфекция, от которой страдают люди, животные, птицы. Актуальность сальмонеллеза обусловлена высокими показателями заболеваемости. В процессе заражения сальмонеллой возникает своеобразная диарея и пищевая токсикоинфекция (острое желудочно-кишечное заболевание). Длина палочки сальмонеллы составляет 2-4 мкм. Она не имеет защитную оболочку, но не поддается влиянию некоторых химических и физических факторов. Например, выдерживает в течение 25-45 минут температуру 70 градусов. Симптомы заражения сальмонеллой могут быть ярко выражены, а могут напоминать заражение другими паразитами. Поэтому для правильного лечения необходимо пройти лабораторную диагностику, сдать необходимые анализы, которые могут подтвердить или опровергнуть наличие сальмонелл в организме.

Практически во всех случаях сальмонеллез путают с отравлением. Последнее вылечить самостоятельно можно, но не сальмонеллез. Он лишь будет прогрессировать. После диагностики сальмонеллеза врач назначает специальную терапию.

Где и когда сдаются анализы на сальмонеллез?

Педиатр, инфекционист, терапевт общей практики, семейный врач, гастроэнтеролог – абсолютно любой доктор может назначить анализ на сальмонеллез. У вас всегда есть выбор: будет это частный диагностический центр или государственное медицинское учреждение. Про все нюансы анализа (смывы, анализ крови, анализ кала) вам должен рассказать направляющий врач.

Как правило, лабораторная диагностика сальмонеллеза проводится 2 раза (первичный и повторный анализ) в одной и той же лаборатории. Это делают для того, чтобы получить достоверный результат, ведь различные лаборатории могут использовать разную среду и ответ может не совпадать.

Обратиться к врачу и пройти лабораторную диагностику сальмонеллеза необходимо в следующих случаях:

• проявление кишечной инфекции, отравления,
• для исключения аппендицита, острого калькулезного холецистита (камни в желчном пузыре), тромбоз сосудов брюшной полости, инфаркт миокарда,
• с целью обследования и профилактики, наблюдение за потенциальными или ранее выявленными очагами инфекции.

Сальмонелла может попасть в организм через мясо домашней птицы (утки, куры), также она проникает через скорлупу в яйцо. Дикие животные, птицы, рыбы, раки, моллюски, домашний скот, коты, собаки, грызуны также являются носителями сальмонеллы. Бактерии выходят вместе с молоком, калом, мочой, слюной, таким образом загрязняя все вокруг.Актуальность сальмонеллеза обусловлена его глобальным распространением.

Метод ПЦР для определения сальмонелл в кале

ПЦР – это методика, которая позволяет выявить остатки ДНК сальмонелл в кале. Перед анализом необходимо заранее подготовиться. Для этого исключаются все медикаменты, которые имеют хоть какое-то влияние на кишечник за 3-е суток до сдачи анализа. Также следует исключить препараты, которые способны менять цвет кала.

Мазок на дизгруппу

Мазок на дизгруппу– это специальное лабораторное исследование, которое назначает врач в случаях подозрения на острую кишечную инфекцию. Благодаря такому анализу выявляется наличие любых микроорганизмов. Также можно определить их чувствительность к антибиотикам. После результатов мазка на дизгруппу доктор назначает домашнее или стационарное лечение. Как правило, после лечения обязательно делается повторный мазок для того, чтобы убедится, что здоровью больше ничего не угрожает.

Бактериологический посев

Такой способ определения наличия сальмонелл в организме и их прироста на сегодняшний день является самым распространенным. Для этого делают анализ кала. Важно чтобы кал был свежим. Например, вы сдаете анализ на сальмонеллез в 10 утра, тогда фекалии должны быть утренними. Таким образом, вы получите точный результат. Иногда исследуются рвотные массы, моча, желчь, гной из очага воспаления, вода после промывки желудка, кишечника.

Серологический метод

В процессе этой диагностики исследуется венозная кровь, а именно наличие в ней антител. В организме зараженного сальмонеллой человека начинают вырабатываться антитела. Анализ крови проводится при явных кишечных симптомах отравления. Также это обследование стоит пройти людям, которые были в близком контакте с зараженным.

Для точного проведения серологической диагностики анализ на сальмонеллез берется несколько раз с интервалом 5-7 дней. 1:200 – минимальный титр антител (предельное разведение пробы сыворотки крови), который должен быть у здорового человека.

Анализ крови занимает намного меньше времени и сил, чем диагностирование при помощи бактериального посева кала. Перед анализом важно ничего не есть целые сутки. Также стоит поберечь себя от стресса и физических нагрузок.

Нормой будет считаться полное отсутствие антител. При этом, обследуемый ранее не болел сальмонеллезом – это важное условие. На начальной стадии заражения антитела могут отсутствовать, поскольку иммунитет человека еще не отреагировал. Поэтому для большой точности анализ крови повторяют спустя 6-7 суток.

Найденные антитела говорят лишь о заражении. Людям, которые ранее уже вылечились от сальмонеллеза не стоит исключать повторное заражение. В организме у человека вырабатывается иммунитет лишь на тот вид сальмонелл, которые были предыдущей причиной заражения. Сегодня медицине известны несколько видов.

У больного титр антител в крови в течение 10 дней увеличивается в 4 раза. В различных лабораториях могут быть разные значения. Поэтому он определяется и подсчитывается для более точного результата. Незначительное и стабильное количество титра антител говорит о том, что в прошлом человек перенес сальмонеллез, но на сегодняшний день абсолютно здоров.

Забор крови на анализ

Для этой процедуры берут небольшое количество крови с вены. После чего смешивают со специальным гелем в пробирке. Благодаря ему активируется процесс свертывания крови. Для получения полной картины заболевания обязательно берется общий и биохимический анализ крови. Таким образом, определяется степень интоксикации, изменение объема электролитов в крови, обезвоживание.

Копрологическое исследование изменение структуры кала

При сальмонеллезе присутствуют определенные изменения кала. Это свидетельствует о том, что бактерии начали влиять на функции и состояние кишечника, а именно:

• выделение с калом крови, лейкоцитов, эритроцитов,
• объем крахмала в организме увеличивается,
• увеличивается количество мышечных волокон, не переваренных в зараженном сальмонеллами желудочно-кишечном тракте.

Серологическое исследование делается на протяжении 5-7 дней, а диагностика методом ПЦР займет сутки. Сколько понадобится времени, прежде чем придет ответ зависит только от того, какой анализ был назначен. Лишь доктор поставит правильный диагноз и назначит необходимое лечение на основе жалоб, осмотра и результатов диагностики.